Genski i proteinski ekspresijski profili prijenosnika Oatp1d1, Oct1 i Oat3 analizirani u embrijima i tkivima odraslih zebrica

Ekspresija mRNA transkripta istraživanih proteinskih prijenosnika u embrionalnim rzvojnim stadijima ribe zebrice (Danio rerio). Espresija je određena qPCR metodom u dva neovisna kruga izolacije RNA iz svakog od razvojnih stadija od zigote do 120 h nakon oplodnje. Razina transkripta za prijenosnik Oatp1d1 označena je plavom bojom, Oct tamno narančastom, a Oat3 sivom bojom linije (crveni okvir u legendi grafikona). MNE – mean normalized expression.

Ekspresija mRNA transkripta istraživanih proteinskih prijenosnika u različitim tkivima odraslih, spolno zrelih riba zebrica (Danio rerio) starih 90-100 dana. Ekspresija je određena qPCR metodom u dva neovisna kruga izolacije RNA iz svakog od tkiva (udružena su tkiva od 5-7, a u slučaju bubrega 10-12 odraslih zebrica). Razine transkripta za prijenosnike Oat3, Oct1 i Oatp1d1 označene su zelenim okvirom unutar tablice. MNE – mean normalized expression.

Prikaz proteinske ekspresije membranskog transportera Oatp1d1 u tkivima odrasle zebrice, embrijima (5 dpf) i kontrolnim stanicama FlpIn293/Oatp1d1 u odnosu na negativnu kontrolu (mock). Specifični signal detektiran je primjenom novorazvijenog i verificiranog protutijela na očekivanim veličinama između 75 i 100 kDa.

Prikaz proteinske ekspresije membranskog transportera Oct1 u tkivima odrasle zebrice, embrijima (4 dpf) i kontrolnim stanicama FlpIn293/Oct1 u odnosu na negativnu kontrolu (mock). Specifični signal detektiran je primjenom novorazvijenog i verificiranog protutijela na očekivanoj veličini oko 75 kDa.

Prikaz proteinske ekspresije membranskog transportera Oat3 u tkivima odrasle zebrice (spolno zrele ženske i muške jedinke, udruženi uzorak od 5 jedinki). Specifični signal detektiran je primjenom novorazvijenog i verificiranog protutijela na očekivanoj veličini oko 100 kDa.

Razvijen homologni model za prijenosnike Mate3 i Mate6

Prikaz trodimenzionalne strukture Mate3 i Mate6 prijenosnika. Model je kreiran homolognim modeliranjem uz pomoć Alphafold 2 (Mate3) i Alphafold (Mate6) algoritma.

Evaluiran fenotip Oatp1d1 deficijentnih embrija i odraslih riba u usporedbi s
WT zebricama

Homozigotne jedinke embrija genetski deficijentnih za Oatp1d1 prijenosnik (oatp1d1 mutant; oatp1d1-/-) ne pokazuju letalni fenotip u embrionalnom razvoju i normalno se razvijaju do spolno zrelih jedinki. Razlika između oatp1d1-/- mutanti i jedinki divljeg tipa (wild type; WT) zamijećena je u pigmentaciji embrija tijekom embrionalnog razdoblja počevši od 24 hpf (hours post fertilization) nadalje. Zamijećeno je da su jedinke divljeg tipa tamnije od oatp1d1-/- embrija, s naglašenijom žutom nijansom tijela divljih jedinki.

Dorzalni prikazi a) četverodnevnih embrija zebrice divljeg tipa s tamnijom pigmentacijom i vidljivo većom zastupljenošću žutih pigmenata; b) embrij oatp1d1-/- mutante.